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口蹄疫病原檢測方法

   日期:2016-08-23     來源:聚農(nóng)網(wǎng)    作者:jn720.com    瀏覽:140    
蹄疫反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR),用于檢測疑似感染動物水皰皮或水皰液中所有血清型口蹄疫病毒,適用于口蹄疫病毒的檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
 
 
  原理:利用異硫氰酸胍方法提取RNA,在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下,以RNA為模板,以引物為起點合成與RNA模板互補的cDNA鏈。利用西安天隆科技有限公司生產(chǎn)的DTC型基因擴(kuò)增儀,在TaqDNA聚合酶的作用下,經(jīng)高溫變性、低溫退火、中溫延伸的循環(huán),使特異性DNA片段的基因拷貝數(shù)放大一倍。經(jīng)過35個循環(huán),最終使基因放大數(shù)百萬倍。將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳,經(jīng)溴化乙錠染色后,在紫外燈照射下,肉眼可見DNA片段的擴(kuò)增帶。該方法可以檢測所有亞型的口蹄疫病毒,檢測結(jié)果為陽性,需進(jìn)一步采用分型診斷試劑盒進(jìn)行進(jìn)一步檢測。
 
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