油乳劑滅活疫苗免疫的唯一方法就是注射，分為皮下注射和肌肉注射。皮下注射以頸部皮下注射為主，肌肉注射可采用淺層胸肌注射和腿肌注射。
1. 頸部皮下注射
頸部由于皮下活動區域較大，皮下血管豐富，油乳劑滅活疫苗吸收迅速，免疫效果好，所以頸部皮下注射是油乳劑滅活疫苗免疫接種的最佳方法。
但是，頸部皮下注射如果注射不當，也會造成嚴重不良后果。頸部由于肌肉較少，如果方法不當將油乳劑滅活疫苗注射到頸部肌肉中，會引起雞頸部肌肉腫脹，表現頸部不能伸直，嚴重影響頸部活動，從而影響雞的正常采食、飲水，造成雞生長發育受阻，嚴重時可導致雞逐漸消瘦，甚至死亡。影響時間可達一個月以上。頸部注射時如果太靠近頭部，注射疫苗后由于油乳劑滅活疫苗在皮下的游離，流到頭和臉的皮下，造成腫頭、腫臉的現象。
頸部皮下注射的正確方法：小雞一人操作；大雞兩人操作，一人保定雞，一人注射。注射時用拇指和食指把雞頸部后1/3處皮膚捏起，使皮膚和肌肉分離，注射器針頭向著背部方向，以小于30度的角度刺入捏起的皮下，注射速度不宜過快。注射時要防止刺穿另一側皮膚將疫苗注射到體外，也要防止注射到肌肉內或刺傷頸椎。
2.腿部肌肉注射
腿部肌肉注射一般不宜采取。腿部肌肉較少，注入油乳劑滅活疫苗不易吸收，影響雞的活動和采食，從而影響生長和生產。由于大腿內側血管和神經較豐富，要防止針頭刺入內側，否則會刺傷神經或血管，導致雞癱瘓或死亡。腿部注射的部位應靠近上部，在膝關節上方，大腿外側。此方法對于籠養雞較好。一般可用左手拉出一只雞腿，撥開外側羽毛，右手持注射器注射。
淺層胸肌注射
3.淺層胸肌注射也是油乳劑滅活疫苗免疫常用的方法。雞的胸部肌肉較豐滿，相應的血管和神經較少，注射油乳劑滅活疫苗時操作較方便，也比較安全，但其吸收較頸部皮下注射稍差一些。如果注射過深，可能會刺入胸腔或刺傷肝臟而導致雞注苗后猝死。
淺層胸肌注射的方法：注射部位在胸部的前1/3處；兩側均可。針頭與注射部位大約成30度角，朝向背部方向刺入胸肌，切忌垂直刺入和在后部刺入，一定要淺層注射，避免深層注射。
