在病理外檢工作中常規石蠟切片及染色的質量是保證病理診斷及時、準確的關鍵。我們在從事病理組織學制片和對病理組織切片的會診中常常發現,由于切片和染色質量不佳,難以做出準確的病理診斷甚至出現錯誤的診斷結論。多年來,我們在病理組織制片技術上積累了豐富的經驗。現將臨床病理制片中常見的問題及解決的辦法總結如下。
1切片不完整或切片困難
1.1實質性器官,如淋巴結、肝、脾組織細胞豐富,細胞間纖維組織含量少,脫水透明時間過長導致細胞嚴重脫水;浸蠟溫度過高導致組織收縮變硬變脆,使制片不完整形成破碎。
1.2纖維瘤,脂肪結締組織等取材過厚,有時未將小淋巴結剖成切面,淋巴結纖維組織膜阻止了脫水透明和浸蠟試劑與組織內部的滲透交換,導致組織脫水不徹底、石蠟不易浸透、組織過軟,切片困難。
1.3處理方法根據組織來源將標本分為大小兩類,分別進行脫水、透明、浸蠟,避免組織過硬或過軟。
(1)胃、腸、子宮等大標本,取材后固定脫水、透明時間和浸蠟時間均不少于10 h。
(2)胃、支氣管、宮頸內膜等小標本脫水透明浸蠟一般6 h完成。取材厚度小于0.2 cm的淋巴結、甲狀腺按小標本處理。
(3)如出現組織過硬無法制片,可將蠟塊放到95%乙醇甘油1∶1混合液中軟化再行切片。出現組織過軟,將蠟塊重新浸蠟后包埋切片。
(4)新鮮組織及時固定。脫水、透明試劑要保持最后一缸的純度。浸蠟溫度不超過65℃,包埋用蠟溫度應高于浸蠟溫度。夏季氣溫高可用熔點60~62℃切片石蠟;冬天氣溫低,可用56~58℃切片石蠟。
2切片皺縮、折疊、破碎、裂紋
2.1刀鋒變鈍、刀鋒上粘有蠟屑、切片刀角度太小、組織浸蠟時間不夠,切片時組織會被皺縮在一起。
2.2漂片水溫過高,如淋巴結、腦組織及含黏液成分較多的組織切片,放到過高水溫中未及時展片,就易粘在一起形成折疊,還可能將含脂肪的組織燙碎。
2.3 切片刀有小缺口,組織中有鈣化、異物、包埋蠟溫過低、蠟塊中出現小白點等,都可造成切片的裂紋。
2.4處理方法
(1)注意檢查刀具,及時移換刀口,及時磨刀,保持刀的鋒利,注意切片刀的清潔并及時清除刀和蠟塊上的蠟屑,防止切片的污染。
(2)調整好刀與蠟塊的角度,雙平面刀傾斜角為12~15度。
(3)包埋組織及修蠟塊應完全,組織周圍應留有0.2 cm余蠟。
(4)用酒精燈加溫漂片,水溫應控制在45~50℃之間。
(5)取材時避免組織中鈣化、線頭及異物。
3切片脫落
3.1組織內含過多的壞死物,細胞崩解后,有形成分減少,附著力下降,局部的滲透壓升高,吸收水分,切片一經固定水分逸出,壞死物質失去細胞的支撐作用,染色時組織易脫落。
3.2漂片水溫過低,切片的微細皺折未展平,造成與載片附貼不牢固。
3.3烤片溫度低時間短,載片不干凈,切片太厚放置室溫太久都能造成切片脫落。
3.4處理辦法取材時避免組織內帶有壞死組織,調整好漂片水溫,烤片溫度在65℃不少于30 min,保持載片清潔,防止灰塵污染。切片厚度應在4 μm。
4切片厚薄不均,切片上有橫紋
4.1切片機微動部分失靈,齒輪跳格。
4.2切片機上的組織塊夾持器或夾刀螺絲未旋緊,刀的斜度太大或太小。
4.3蠟塊太硬過大,轉動時刀刃受到震動。
4.4切片時用力、速度不均勻。
5切片染色對比不佳及染色污染
5.1切片脫蠟不徹底,細胞不易著色;切片過厚導致細胞重疊;蘇木素染色時間過長,分化時間不夠,胞核著色深,核仁分辨不清。
5.2表面有氧化金屬膜的蘇木素染液易污染切片,其染液使用超過半年以上,成分及濃度都發生了變化,染色力下降,延長時間易造成核漿共染。
5.3處理辦法脫蠟入水后切片成云霧狀,應延長脫蠟時間或更換脫蠟用試劑。分化后肉眼觀查切片呈淡藍色為良好。新配蘇木素易產生氧化金屬膜應及時過濾。蘇木素染色超過5 min,染色效果不佳應及時更換。